技术原理:

shRNA与RNAi核酸酶Dicer结合后,被切割成21~23nt的siRNA,再被输送到RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC),并引导RISC与同源性mRNA结合。核酸酶在siRNA反义链与mRNA所形成的双链区的中央区域切断并降解mRNA,导致靶基因的转录后沉默。


技术优势:

(1) 构建的shRNA载体,可以进行多位点整合,基因表达量高,并能稳定遗传。

(2) 实验前进行严格的预实验(包括验证细胞单克隆形成率,最佳电转效率条件摸索,细胞最小全致死浓度,靶位点附近序列验证等),提高项目一次通过率,大大缩短实验周期。

(3) 干扰稳转细胞株项目,默认提供QPCR验证服务。


质量控制:shRNA载体经过测序验证,阳性克隆经过QPCR验证过干扰效果后交付。


应用:基因功能研究,药物靶点筛选;细胞信号传导通路分析;疾病治疗。