基因过表达和沉默是研究基因功能的常见手段，基因过表达/沉默指的是在目标细胞中过量表达/沉默目的基因，一般来说可以通过质粒载体或病毒载体感染目标细胞，并通过药物筛选等手段来来获得目的基因稳定过表达的细胞株。


1、技术原理：

将外源DNA克隆到具有抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选，得到可稳定表达目的蛋白的细胞株。通过选择不同的启动子，可以调控目的蛋白的表达时间、空间和强度。


2、技术优势：

① 过表达载体经过优化，整合效率高，可以实现长达10kb的目的片段整合。

② 实验前进行严格的预实验（包括验证细胞单克隆形成率，最佳电转效率条件摸索，细胞最小全致死浓度，靶位点附近序列验证等），提高项目一次通过率，大大缩短实验周期。

③ 除了DNA水平的验证，还可以进行QPCR验证阳性克隆目的基因表达情况。


3、质量控制：
过表达载体经过测序验证，阳性克隆经过QPCR验证表达效果后交付。


4、应用：
上调目的蛋白表达量，研究基因功能；模拟人类疾病；进行药物筛选等。