CRISPR/Cas9介绍

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是2013年发现的一种由RNA指导Casa核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。 其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA(gRNA)识别特定基因组位点PAM)并对双链DNA进行切割造成双链断裂,随之利用细胞的非同源末端连接(Non homologous End Joining,NHEJ)或同源重组(Homologous Recombination, HR)的方式对切割位点进行修复,实现DNA水平基因敲除或精确编辑。


基因敲除载体

1、技术原理:

CRISPR/Cas9系统的工作原理是crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracr-RNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/crRNA复合物,该复合物引导核酸酶Cas9蛋白在与crRNA配对的序列靶位点剪切双链DNA。而通过人工设计这两种RNA,可以改造形成具有引导作用的sgRNA(shortguideRNA),以引导Cas9对DNA的定点切割。


 基因敲除载体服务基因敲除:

基因敲除载体


2、技术优势:

① 操作简单,周期短,效率高,修饰精准;

② 风险低:选用特异性gRNA降低脱靶风险;

③ 适用范围广:适用于人,小鼠,大鼠以及其他哺乳动物等各种细胞系的靶向敲除/突变/敲入。


3、质量控制:

① gRNA序列测序

② 载体酶切鉴定

③ 载体实验报告


4、应用:

研究基因/蛋白的功能;模拟人类疾病进行药物研究和筛选;靶点验证等。

 

我们的敲除系列载体包括单敲除和双敲除,可选择不同抗性以及,是否带荧光标记或者不同荧光标记等供客户选择,种类丰富,使用方便快捷。